2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Rapida PCR-premiksaĵo kun alta efikeco kaj alta streĉa rezisto.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ estas nove optimumigita kaj plibonigita preta 2 × PCR-premikso kun ĉiuj esencaj partoj en PCR-reago krom DNA-ŝablono kaj enkondukoj.

Kato. Ne Pakanta Grandeco
4993001 1ml
4993002 5x1ml
4992912 20x5x1 ml
4992913 5 × 1ml
4992920 20 × 5 × 1ml
4992921 20 × 5 × 1ml

Produkta Detalo

Eksperimenta Ekzemplo

Oftaj Demandoj

Produktaj Etikedoj

Trajtoj

■ Alta plifortiga efikeco: DNA-fragmentoj de malsamaj grandecoj (malpli ol 5 kb) kaj fontoj povas esti plifortigitaj efike.
■ Alta sentemo: Nur 10 pg da celaj fragmentoj povas esti plifortigitaj de genomaj ŝablonoj.
■ Alta streĉa rezisto: Por ŝablonoj kun alta malpura enhavo kiel malglate eltirita ŝablono / bakteria kulturo, la cela fragmento povas esti facile plifortigita. La polimerasa agado ne estos influita de ripeta frosto kaj degelo.
■ Konvena por aplikoj: La reaga sistemo estis preparita facile kaj rapide. La plifortigita fragmento enhavas la 3 '-finan dA-superpendaĵon, kiu estas oportuna por TA klonado.

Specifo

Tipo: Taq DNA-polimerazo
Specimeno: Purigita / krude eltirita ŝablono / bakteria kulturo
Ŝablono: > 10 pĝ
Fragmento grandeco: <5 kb
Aplikoj: PCR-plifortigo de DNA-fragmentoj, DNA-markado, enkonduka etendaĵo, sekvenco-determinado, grandskala gendetekto, duon-kvantaj PCR-eksperimentoj, detekto de spur-DNA, ktp.

Ĉiuj produktoj povas esti personecigitaj por ODM / OEM. Por detaloj,bonvolu alklaki Agorditan Servon (ODM / OEM)


  • Antaŭa:
  • Sekva:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Figuro 1. Ŝablonoj el diversaj fontoj estis plifortigitaj de TIANGEN Taq MasterMix II kaj la komuna Taq Mix de Provizanto TR respektive por detekti la streĉan reziston de la reakciiloj. La rezultoj montras, ke TIANGEN-produktoj povas plifortigi la celajn fragmentojn de krudaj genomaj ŝablonoj kaj bakteria kulturo, kaj la streĉa rezisto estas pli bona ol tiu de Provizanto TR. A: Kruda genomika ŝablono ĉerpita de TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp / DN: Kruda eltiro kaj detekto de specimenoj de homa sango. Rizo: Kruda ekstraktado kaj detekto de rizaj specimenoj. B: Kolonio PCR. La PCR-fragmento estas 700 bp.
    M: TIANGEN Marker III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Bona universaleco por ŝablonoj el diversaj fontoj kaj kun diversaj longoj
    Figuro 2. Fragmentoj de diversaj fontoj kaj longoj estis plifortigitaj per TIANGEN Taq MasterMix II (A) kaj ordinara Taq Miksaĵo de Provizanto TK (B), Provizanto TR (C), Provizanto V (D) kaj Provizanto G (E) respektive. La rezultoj montras, ke la ampleksa agado de TIANGEN-produktoj estas la plej bona laŭ plifortiga kapablo, specifeco kaj universaleco. M: TIANGEN Marker III1: Sojfabora genomika DNA-ŝablono (120 bp);

    2-3: Riza genomika DNA-ŝablono (694 pb, 2258 pb);

    4: Kotona genomika DNA-ŝablono (200 bp);

    5: Escherichia coli genomika DNA-ŝablono (2298 bp);

    6-7: Ŝablona DNA-musa genaro (1 kb, 2 kb);

    8-10: Rata genomika DNA-ŝablono (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

    11-18: Ŝablona DNA pri homa genaro (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

    1000 bp, 1090 bp (GC%: 70,4%), 2 kb, 4 kb)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Alta sentemo
    Figuro 3. Malsamaj koncentriĝoj de rataj kaj homaj DNA-fragmentoj estis plifortigitaj per TIANGEN Taq MasterMix II (A), ordinara Taq Miksaĵo de Provizanto V (B) kaj Provizanto TK (C), respektive, por detekti la amplifan sentemon. La rezultoj montras, ke produkto TIANGEN povus plifortigi la celan fragmenton de la genoma ŝablono ĝis 0,01 ng, kaj ĝia sentemo estas pli bona ol tiu de la produktoj de Provizanto V kaj TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate input 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng.
    Q: Neniuj plifortigaj bandoj

    A-1-Ŝablono

    ■ La ŝablono enhavas proteinajn malpuraĵojn aŭ inhibitorojn de Taq, ktp. ——Purigi DNA-ŝablonon, forigi proteinajn malpuraĵojn aŭ ĉerpi ŝablonan DNA per purigaj ilaroj.

    ■ La denaturigo de ŝablono ne estas kompleta —— Taŭge pliigi denaturigan temperaturon kaj plilongigi denaturigan tempon.

    ■ Ŝablona degradado ——Re-preparu la ŝablonon.

    A-2-Enkonduko

    ■ Malbona kvalito de enkondukoj ——Re-sintezi la enkondukon.

    ■ Unua degradado ——Aliquot la altaj koncentriĝaj enkondukoj en malgrandan volumon por konservado. Evitu multoblajn frostojn kaj degelojn aŭ longdaŭrajn 4 ° C kriokonservitajn.

    ■ Nedeca projektado de enkondukoj (ekz. Enkonduka longo ne sufiĉas, dimero formiĝis inter enkondukoj, ktp.) -Resinaj enkondukoj (evitu formadon de enkonduka dimero kaj duaranga strukturo)

    A-3 Mg2+koncentriĝo

    ■ Mg2+ koncentriĝo estas tro malalta ——Propre pliigi Mg2+ koncentriĝo: Optimumigi la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    A-4-temperado

    ■ La alta temperateco influas la ligadon de enkonduko kaj ŝablono. —— Redukti la kalcinan temperaturon kaj optimumigi la staton kun gradiento de 2 ° C.

    A-5 Plilongiga tempo

    ■ Mallonga plilongiga tempo —— Pliigi plilongigan tempon.

    Q: Falsa pozitiva

    Fenomenoj: Negativaj specimenoj ankaŭ montras la celajn sekvencajn bandojn.

    A-1-Poluado de PCR

    ■ Krucpoluado de celsekvenco aŭ plifortigaj produktoj ——Zorge ne pipeti la specimenon enhavantan celsekvencon en la negativa specimeno aŭ elverŝi ilin el la centrifuga tubo. La reakciiloj aŭ ekipaĵoj devas esti aŭtoklavitaj por forigi ekzistantajn nukleajn acidojn, kaj la ekzisto de poluado devas esti determinita per negativaj kontrolaj eksperimentoj.

    ■ Reakcia poluado ——Aliquot la reakciiloj kaj konservu al malalta temperaturo.

    A-2-Primor

    ■ Mg2+ koncentriĝo estas tro malalta ——Propre pliigi Mg2+ koncentriĝo: Optimumigi la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    ■ Nedeca projekcio de enkonduko, kaj la cela sekvenco havas homologion kun la ne-cela sekvenco. ——Re-projektaj enkondukoj.

    Q: Nespecifa plifortigo

    Fenomenoj: La PCR-amplifaj grupoj ne kongruas kun la atendata grandeco, ĉu granda ĉu malgranda, ĉu foje okazas ambaŭ specifaj amplifaj bandoj kaj nespecifaj amplifaj bandoj.

    A-1-Enkonduko

    ■ Malbona primara specifaĵo

    ——Re-projekta enkonduko.

    ■ La enkonduka koncentriĝo estas tro alta ——Proponu pliigi la denaturigan temperaturon kaj plilongigi la denaturigan tempon.

    A-2 Mg2+ koncentriĝo

    ■ La Mg2+ koncentriĝo estas tro alta ——Propre reduktu la koncentriĝon de Mg2 +: Optimumigu la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    A-3 Thermostable polimerazo

    ■ Troa enzima kvanto ——Redukti enziman kvanton taŭge laŭ intertempoj de 0,5 U.

    A-4-temperado

    ■ La kaluma temperaturo estas tro malalta —— Taŭge pliigu la kalcinan temperaturon aŭ alprenu la dufazan kalcinan metodon

    A-5-PCR-cikloj

    ■ Tro multaj PCR-cikloj —— Redukti la nombron de PCR-cikloj.

    P: Flikaj aŭ makulaj bandoj

    A-1-Enkonduko——Malbona specifeco ——Re-projektu la enkondukon, ŝanĝu la pozicion kaj longon de la enkonduko por plibonigi ĝian specifecon; aŭ plenumu nestitan PCR.

    A-2-Ŝablona DNA

    ——La ŝablono ne estas pura ——Purigu la ŝablonon aŭ ĉerpu DNA per purigiloj.

    A-3 Mg2+ koncentriĝo

    ——Mg2+ koncentriĝo estas tro alta ——Vere reduktu Mg2+ koncentriĝo: Optimumigi la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    A-4 dNTP

    ——La koncentriĝo de dNTP estas tro alta ——Reduktu la koncentriĝon de dNTP konvene

    A-5 Rekvanta temperaturo

    ——Tre malalta temperatura temperado ——Tone plialtiĝu la temperaturo de la temperado

    A-6-Cikloj

    —— Tro multaj cikloj ——Optimigu la ciklan numeron

    Q: Kiom da ŝablona DNA aldoniĝu en 50 μl-PCR-reaga sistemo?
    ytry
    Q: Kiel plifortigi longajn fragmentojn?

    La unua paŝo estas elekti la taŭgan polimerazon. Regula Taq-polimerazo ne povas provlegi pro manko de 3'-5'-eksonuclease-agado, kaj misagordo multe reduktos la etendaĵefikecon de fragmentoj. Tial regula Taq-polimerazo ne povas efike plifortigi celajn fragmentojn pli grandajn ol 5 kb. Taq-polimerazo kun speciala modifo aŭ alia altfidela polimerazo devas esti elektita por plibonigi etendan efikecon kaj plenumi la bezonojn de longa fragmenta plifortigo. Krome, la plifortigo de longaj fragmentoj ankaŭ postulas respondan ĝustigon de enkonduka projektado, denaturiga tempo, plilongiga tempo, bufra pH, ktp. Kutime, enkondukoj kun 18-24 bp povas konduki al pli bona rendimento. Por malebligi ŝablonan damaĝon, la denaturiga tempo je 94 ° C reduktiĝu al 30 sek aŭ malpli po ciklo, kaj la tempo por levi temperaturon ĝis 94 ° C antaŭ ol plifortigo estu malpli ol 1 min. Cetere, agordi la etendan temperaturon je ĉirkaŭ 68 ° C kaj projekti la etendan tempon laŭ la rapideco de 1 kb / min povas certigi efikan plifortigon de longaj fragmentoj.

    Q: Kiel plibonigi la plifortigan fidelecon de PCR?

    La erarofteco de PCR-plifortigo povas esti reduktita uzante diversajn DNA-polimerazojn kun alta fideleco. Inter ĉiuj ĝisnunaj Taq-DNA-polimerazoj trovitaj, Pfu-enzimo havas la plej malaltan eraroftecon kaj la plej altan fidelecon (vidu ĉemetitan tabelon). Aldone al enzimelekto, esploristoj povas plu redukti PCR-mutacioftecon optimumigante reagokondiĉojn, inkluzive de optimumigado de bufrokunmetaĵo, koncentriĝo de termostabila polimerazo kaj optimumigado de PCR-ciklonombro.

    Skribu vian mesaĝon ĉi tie kaj sendu ĝin al ni