Ultra HiFidelity PCR-Ilaro

Alta fideleco, alta specifeco kaj alta efikeco varma starta PCR-premikso.

Ultra HiFidelity PCR Kit estas nova altfidela PCR-plifortiga premikso taŭga por PCR-rilata klonado kaj detekto. La Ultra HiFi DNA-Polimerazo enhavita en la ilaro estas nova rapida kaj altfidela DNA-polimerazo evoluigita per direktita molekula evolua teknologio. Ĝi plibonigas la afinecon de DNA-polimerazo al ŝablonoj, plibonigas la plifortigan rapidecon kaj etendan kapablon de la enzimo, kaj pliigas la sukcesan indicon de PCR kaj produkta rendimento.

Kato. Ne Pakanta Grandeco
4992970 1ml
4992971 5 * 1ml
4992978 5 * 5 * 1ml

 

 


Produkta Detalo

Eksperimenta Ekzemplo

Oftaj Demandoj

Produktaj Etikedoj

Trajtoj

■ Facile funkciebla: Ĉi tiu ilaro estas provizita kiel 2 × premiksaĵo, kaj PCR povas esti plenumita simple aldonante ŝablonojn kaj enkondukojn.
■ Alta fideleco: la fideleco estas 50 fojojn pli granda ol tiu de Taq-polimerazo.
■ Alta specifeco: Bonega komenca agado por certigi produktan specifecon ..
■ Rapida plifortigo: La etenda rapido povas atingi 10-15 sek / kb.
■ Forta etendebleco: Ĝis 20 kb-DNA-fragmentoj povas esti plifortigitaj.
■ Vasta aplikebleco: La ilaro enhavas PCR Enhancer kaj taŭgas por plifortigi altajn GC kaj kompleksajn ŝablonojn.

Specifo

Tipo: Altfidela DNA-Polimerazo
Plifortiga rapideco: 10-15 sek / kb
Fragmentograndeco: <20kb
Aplikoj: Altfidela PCR-plifortigo, genklonado, alta GC-ŝablonplifortigo, genklonado de kompleksaj genaroj, cDNA-altfidela plifortigo, SNP-detekto, ejo-specifa mutacio, ktp.
DNA-Ekstrakta Rendimento de Diversaj Plantaj Histoj:
Noto: DNA-rendimento dependas de specimenaj specoj. Ĉiuj supraj materialoj estas el molaj folioj.

Ĉiuj produktoj povas esti personecigitaj por ODM / OEM. Por detaloj,bonvolu alklaki Agorditan Servon (ODM / OEM)


  • Antaŭa:
  • Sekva:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Varma komenco por certigi produktan specifecon
    Figuro 1. Ultra HiFi havas bonegan varman funkcion por certigi la specifecon de amplifaj produktoj. Oni aplikis metodon de molekulaj lumturoj (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
    Experimental Example Bonega alta fideleco, 50 fojojn pli alta ol Taq-Polimerazo
    Figuro 2. La fideleco de Ultra HiFi estas 50 fojojn pli alta ol tiu de ofta Taq-polimerazo. La polimeriga fideleco de Taq-polimerazo (sen korekta agado) estas uzata kiel referenco.
    Experimental Example Rapida plifortigo kaj longaj fragmentoj povas esti plifortigitaj rapide
    Fig. 3. Ultra HiFi povas etendi ĝis 5 sek / kb por fragmentoj malpli grandaj ol 4 kb. Por longaj fragmentoj, la plifortiga tempo povas esti plilongigita konvene. Por fragmentoj pli ol 15 kb, la ampleksoorapideco povas esti ĝis 30 sek / kb. M: TIANGEN D15000-Markilo
    Experimental Example Experimental Example Experimental Example Forta universaleco kaj alta specifeco, facile legebla alta GC kaj longaj fragmentoj de diversaj fontoj
    Figuro 4. Ultra HiFi havas altan specifecon por certigi plifortigan sukcesan indicon kaj produktan kvanton por diversaj specoj de ŝablonoj.
    A. Ultra HiFi-amplifaj rezultoj
    B. Hi-Fi-enzimaj amplifrezultoj de Provizanto K
    C. Hi-Fi-enzimaj amplifrezultoj de Provizanto N
    M: TIANGEN D15000-Markilo
    Leno 1-5. Plifortigaj rezultoj de ŝablonoj kun malsama longo: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3.
    2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb
    Leno 6. Plifortiga rezulto de alta GC-ŝablono: 1915 bp (GC%: 70%);
    Leno 7-11. Plifortiga rezulto de 2 kb-ŝablonoj el diversa genaro: 7. Rato; 8.
    Rizo; 9. Tritiko; 10. Maizo; 11. Bakterioj;
    Leno 12-14. 8 kb longa fragmento-plifortiga rezulto: 12. Rizo; 13. Maizo;
    Q: Neniuj plifortigaj bandoj

    A-1-Ŝablono

    ■ La ŝablono enhavas proteinajn malpuraĵojn aŭ inhibitorojn de Taq, ktp. ——Purigi DNA-ŝablonon, forigi proteinajn malpuraĵojn aŭ ĉerpi ŝablonan DNA per purigaj ilaroj.

    ■ La denaturigo de ŝablono ne estas kompleta —— Taŭge pliigi denaturigan temperaturon kaj plilongigi denaturigan tempon.

    ■ Ŝablona degradado ——Re-preparu la ŝablonon.

    A-2-Enkonduko

    ■ Malbona kvalito de enkondukoj ——Re-sintezi la enkondukon.

    ■ Unua degradado ——Aliquot la altaj koncentriĝaj enkondukoj en malgrandan volumon por konservado. Evitu multoblajn frostojn kaj degelojn aŭ longdaŭrajn 4 ° C kriokonservitajn.

    ■ Nedeca projektado de enkondukoj (ekz. Enkonduka longo ne sufiĉas, dimero formiĝis inter enkondukoj, ktp.) -Resinaj enkondukoj (evitu formadon de enkonduka dimero kaj duaranga strukturo)

    A-3 Mg2+koncentriĝo

    ■ Mg2+ koncentriĝo estas tro malalta ——Propre pliigi Mg2+ koncentriĝo: Optimumigi la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    A-4-temperado

    ■ La alta temperateco influas la ligadon de enkonduko kaj ŝablono. —— Redukti la kalcinan temperaturon kaj optimumigi la staton kun gradiento de 2 ° C.

    A-5 Plilongiga tempo

    ■ Mallonga plilongiga tempo —— Pliigi plilongigan tempon.

    Q: Falsa pozitiva

    Fenomenoj: Negativaj specimenoj ankaŭ montras la celajn sekvencajn bandojn.

    A-1-Poluado de PCR

    ■ Krucpoluado de celsekvenco aŭ plifortigaj produktoj ——Zorge ne pipeti la specimenon enhavantan celsekvencon en la negativa specimeno aŭ elverŝi ilin el la centrifuga tubo. La reakciiloj aŭ ekipaĵoj devas esti aŭtoklavitaj por forigi ekzistantajn nukleajn acidojn, kaj la ekzisto de poluado devas esti determinita per negativaj kontrolaj eksperimentoj.

    ■ Reakcia poluado ——Aliquot la reakciiloj kaj konservu al malalta temperaturo.

    A-2-Primor

    ■ Mg2+ koncentriĝo estas tro malalta ——Propre pliigi Mg2+ koncentriĝo: Optimumigi la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    ■ Nedeca projekcio de enkonduko, kaj la cela sekvenco havas homologion kun la ne-cela sekvenco. ——Re-projektaj enkondukoj.

    Q: Nespecifa plifortigo

    Fenomenoj: La PCR-amplifaj grupoj ne kongruas kun la atendata grandeco, ĉu granda ĉu malgranda, ĉu foje okazas ambaŭ specifaj amplifaj bandoj kaj nespecifaj amplifaj bandoj.

    A-1-Enkonduko

    ■ Malbona primara specifaĵo

    ——Re-projekta enkonduko.

    ■ La enkonduka koncentriĝo estas tro alta ——Proponu pliigi la denaturigan temperaturon kaj plilongigi la denaturigan tempon.

    A-2 Mg2+ koncentriĝo

    ■ La Mg2+ koncentriĝo estas tro alta ——Propre reduktu la koncentriĝon de Mg2 +: Optimumigu la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    A-3 Thermostable polimerazo

    ■ Troa enzima kvanto ——Redukti enziman kvanton taŭge laŭ intertempoj de 0,5 U.

    A-4-temperado

    ■ La kaluma temperaturo estas tro malalta —— Taŭge pliigu la kalcinan temperaturon aŭ alprenu la dufazan kalcinan metodon

    A-5-PCR-cikloj

    ■ Tro multaj PCR-cikloj —— Redukti la nombron de PCR-cikloj.

    P: Flikaj aŭ makulaj bandoj

    A-1-Enkonduko——Malbona specifeco ——Re-projektu la enkondukon, ŝanĝu la pozicion kaj longon de la enkonduko por plibonigi ĝian specifecon; aŭ plenumu nestitan PCR.

    A-2-Ŝablona DNA

    ——La ŝablono ne estas pura ——Purigu la ŝablonon aŭ ĉerpu DNA per purigiloj.

    A-3 Mg2+ koncentriĝo

    ——Mg2+ koncentriĝo estas tro alta ——Vere reduktu Mg2+ koncentriĝo: Optimumigi la Mg2+ koncentriĝo per serio de reagoj de 1 mM ĝis 3 mM kun intervalo de 0,5 mM por determini la optimuman Mg2+ koncentriĝo por ĉiu ŝablono kaj enkonduko.

    A-4 dNTP

    ——La koncentriĝo de dNTP estas tro alta ——Reduktu la koncentriĝon de dNTP konvene

    A-5 Rekvanta temperaturo

    ——Tre malalta temperatura temperado ——Tone plialtiĝu la temperaturo de la temperado

    A-6-Cikloj

    —— Tro multaj cikloj ——Optimigu la ciklan numeron

    Q: Kiom da ŝablona DNA aldoniĝu en 50 μl-PCR-reaga sistemo?
    ytry
    Q: Kiel plifortigi longajn fragmentojn?

    La unua paŝo estas elekti la taŭgan polimerazon. Regula Taq-polimerazo ne povas provlegi pro manko de 3'-5'-eksonuclease-agado, kaj misagordo multe reduktos la etendaĵefikecon de fragmentoj. Tial regula Taq-polimerazo ne povas efike plifortigi celajn fragmentojn pli grandajn ol 5 kb. Taq-polimerazo kun speciala modifo aŭ alia altfidela polimerazo devas esti elektita por plibonigi etendan efikecon kaj plenumi la bezonojn de longa fragmenta plifortigo. Krome, la plifortigo de longaj fragmentoj ankaŭ postulas respondan ĝustigon de enkonduka projektado, denaturiga tempo, plilongiga tempo, bufra pH, ktp. Kutime, enkondukoj kun 18-24 bp povas konduki al pli bona rendimento. Por malebligi ŝablonan damaĝon, la denaturiga tempo je 94 ° C reduktiĝu al 30 sek aŭ malpli po ciklo, kaj la tempo por levi temperaturon ĝis 94 ° C antaŭ ol plifortigo estu malpli ol 1 min. Cetere, agordi la etendan temperaturon je ĉirkaŭ 68 ° C kaj projekti la etendan tempon laŭ la rapideco de 1 kb / min povas certigi efikan plifortigon de longaj fragmentoj.

    Q: Kiel plibonigi la plifortigan fidelecon de PCR?

    La erarofteco de PCR-plifortigo povas esti reduktita uzante diversajn DNA-polimerazojn kun alta fideleco. Inter ĉiuj ĝisnunaj Taq-DNA-polimerazoj trovitaj, Pfu-enzimo havas la plej malaltan eraroftecon kaj la plej altan fidelecon (vidu ĉemetitan tabelon). Aldone al enzimelekto, esploristoj povas plu redukti PCR-mutacioftecon optimumigante reagokondiĉojn, inkluzive de optimumigado de bufrokunmetaĵo, koncentriĝo de termostabila polimerazo kaj optimumigado de PCR-ciklonombro.

    Skribu vian mesaĝon ĉi tie kaj sendu ĝin al ni