Magneta Sango-Genomika DNA-Ilaro

A-1 Malalta koncentriĝo de ĉeloj aŭ virusoj en la komenca specimeno — Riĉigu la koncentriĝon de ĉeloj aŭ virusoj.

A-2 Nesufiĉa lizo de la specimenoj - La specimenoj ne miksis ĝisfunde kun la liza bufro. Oni sugestas funde miksi per pulso-vorticado 1-2 fojojn. —Nesufiĉa ĉela lizo kaŭzita de la malpliiĝo de aktiveco de proteinazo K. —Nesufiĉa ĉela lizo aŭ proteina degradiĝo pro nesufiĉa varma banotempo. Oni sugestas tranĉi la ŝtofon en malgrandajn pecojn kaj plilongigi la banan tempon por forigi la tutan restaĵon en la lisato.

A-3 Nesufiĉa adsorbado de DNA. —Ne aldonis etanolo aŭ malalta procento anstataŭ 100% etanolo antaŭ ol la lisato transiĝis al la spina kolumno.

A-4 La pH-valoro de eluka bufro estas tro malalta. —Aĝustigu la pH inter 8.0-8.3.

Postrestanta etanolo en la eluento.

—Estas resta lava bufro PW en la eluento. La etanolo povas esti forigita per centrifugado de la spinkolono dum 3-5 min, kaj poste metado ĉe ĉambra temperaturo aŭ 50 ℃ kovilo dum 1-2 min.

A-1 La specimeno ne freŝas. —Ĉerpu pozitivan specimenan DNA kiel kontrolon por determini ĉu la DNA en la specimeno malpliiĝis.

A-2 Nedeca antaŭtraktado. —Kaŭzita de troa muelado de likva nitrogeno, reakiro de humido aŭ tro granda kvanto de la specimeno.

La pretraktadoj devas varii laŭ diversaj specimenoj. Por plantaj specimenoj, certigu plene mueli en likva nitrogeno. Por specimenoj de bestoj, homogenigi aŭ funde mueli en likva nitrogeno. Por specimenoj kun ĉelaj muroj malfacile rompeblaj, kiel bakterioj G + kaj feĉo, oni sugestas uzi lisozimon, liticazon aŭ mekanikajn metodojn por rompi la ĉelajn murojn.

4992201/4992202 Plant Genomic DNA-Kit adoptas kolon-bazitan metodon, kiu postulas kloroformon por la ekstraktado. Ĝi taŭgas precipe por diversaj plantaj specimenoj, kaj ankaŭ por planta seka pulvoro. Hi-DNAsecure Plant Kit ankaŭ estas kolon-bazita, sed kun neniu bezono de fenolo / kloroforma ekstraktado, igante ĝin sekura kaj ne-toksa. Ĝi taŭgas por plantoj kun alta polisakaridoj kaj polifenola enhavo. 4992709/4992710 DNAquick Plant System adoptas likvan bazitan metodon. Ankaŭ ne necesas eltiro de fenolo / kloroformo. La puriga procedo estas simpla kaj rapida sen limo por la specimenaj komencaj kvantoj, do uzantoj povas adapti la kvanton flekse laŭ la eksperimentaj postuloj. Granda grandeco de gDNA-fragmentoj povas esti akirita kun alta rendimento.

La genomika DNA estis ĉerpita el diversaj volumoj de homaj tutaj sangospecimenoj per TIANamp Blood DNA Kit. La rezultoj estas kiel sekvas. La rezultoj estas listigitaj kiel referenco nur, la realaj eltiraj rezultoj dependas de la kondiĉoj de specimenoj.

La eltiraĵo de DNA de sangokoagulaĵo povas plenumi per la reakciiloj provizitaj en ĉi tiuj du iloj simple ŝanĝante la protokolon al la specifa instrukcio por la DNA-eltiraĵo de sangokoagulaĵoj. La mola kopio de la protokolo pri eltiro de DNA de sangokoagulaĵo povas esti eldonita laŭ peto.

Pendigu la freŝan specimenon per 1 ml de PBS, normala salo aŭ TE-bufro. Tute homogenigi la specimenon per homogenigilo kaj kolekti la precipitaĵon ĝis la fundo de tubo per centrifugado. Forĵetu la supernatant, kaj resuspendu la precipitaĵon per 200 μl-bufro GA. La sekva DNA-purigado povas esti plenumita laŭ la instrukcio.

Por la purigo de gDNA en specimenoj de plasmo, serumo kaj korpa fluido, TIANamp Micro DNA Kit estas rekomendinda. Por la purigo de virusa gDNA el serumaj / plasmaj specimenoj, TIANamp-Virusa DNA-RNA-Ilaro rekomendas. Por la purigo de bakteria gDNA el serumaj kaj plasmaj specimenoj, TIANamp Bacteria DNA Kit estas rekomendinda (lisozimo devas esti inkluzivita por pozitiva bakterio). Por salivaj specimenoj, rekomendas Hi-Swab DNA Kit kaj TIANamp Bacteria DNA Kit.

DNAsecure Plant Kit aŭ DNAquick Plant System estas rekomenditaj por funga genara ekstraktado. Por ĉerpa genoma ekstraktado, TIANamp Yeast DNA Kit estas rekomendinda (liticazo estu mem preparita).