RNApura Ilaro

A-1 Ĉela lizo aŭ homogenigo ne sufiĉas

---- Redukti specimenan uzadon, pliigi la kvanton de liza bufro, pliigi homogenigon kaj lizi-tempon.

A-2-Ekzempla kvanto estas tro granda

---- Redukti la kvanton de uzata specimeno aŭ pliigi la kvanton de liza bufro.

A-1 Nesufiĉa ĉela lizo aŭ homogenigo

---- Redukti specimenan uzadon, pliigi la kvanton de liza bufro, pliigi homogenigon kaj lizi-tempon.

A-2-Ekzempla kvanto estas tro granda

---- Bonvolu raporti al la maksimuma prilaborado.

A-3-RNA ne estas eluita tute de la kolumno

---- Post aldono de RNase-Libera akvo, lasu ĝin kelkajn minutojn antaŭ centrifugado.

A-4 Etanolo en la eluento

---- Post lalavado, centrifugu denove kaj forigu laŭeble la lavbufron.

A-5 Ĉela kulturmedio ne estas tute forigita

---- Kiam vi kolektas ĉelojn, bonvolu certigi forigi la kulturmedion kiel eble plej multe.

A-6 La ĉeloj stokitaj en RNAstore ne efike centrifugiĝas

---- Denseco de RNAstore estas pli granda ol la averaĝa ĉelkultura medio; do la centrifuga forto devas esti pliigita. Oni sugestas centrifugi je 3000x g.

A-7 Malalta RNA-enhavo kaj abundo en la specimeno

---- Uzu pozitivan specimenon por determini ĉu la malaltan rendimenton kaŭzas la specimeno.

A-1 La materialo ne estas freŝa

---- Freŝaj ŝtofoj devas esti stokitaj en likva nitrogeno tuj aŭ tuj metitaj en la reakciilon RNAstore por certigi la ekstraktan efikon.

A-2-Ekzempla kvanto estas tro granda

---- Redukti specimenan kvanton.

A-3 RNase contamination

---- Kvankam la bufro provizita en la ilaro ne enhavas RNase, estas facile polui RNase dum eltira procezo kaj devas esti pritraktita kun zorgo.

A-4 Elektroforeza poluado

---- Anstataŭigu la elektroforezan bufron kaj certigu, ke la konsumeblaj kaj Ŝarĝa bufro estas liberaj de poluado kun RNase.

A-5 Tro multe da ŝarĝo por elektroforezo

---- Redukti la kvanton de specimenaj ŝarĝoj, la ŝarĝo de ĉiu puto ne devas superi 2 μg.

A-1-Ekzempla kvanto estas tro granda

---- Redukti specimenan kvanton.

Al-2 Iuj specimenoj havas altan DNA-enhavon kaj povas esti traktataj per DNazo.

---- Faru RNase-Free DNase-kuracadon al la akirita RNA-solvo, kaj la RNA povas esti rekte uzata por postaj eksperimentoj post kuracado, aŭ povas esti plu purigita per RNA-purigaj kompletoj.

Por vitropecoj, bakitaj je 150 ° C dum 4 h. Por plastaj ujoj, mergitaj en 0,5 M NaOH dum 10 min, tiam plene ellavitaj per senpaga akvo per RNase kaj poste steriligi por tute forigi RNase. La reakciiloj aŭ solvoj uzataj en la eksperimento, precipe akvo, devas esti liberaj de RNazo. Uzu RNase-liberan akvon por ĉiuj reakciaj preparoj (aldonu akvon al pura vitra botelo, aldonu DEPC al fina koncentriĝo de 0,1% (V / V), skuu dum la nokto kaj aŭtoklavu).